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① 細胞克隆性檢測的意義
細胞克隆性檢測是指通過檢測細胞群體中是否存在單克隆性增殖，來判斷是否存在腫瘤或其他克隆性疾病的診斷方法。克隆性檢測在疾病診療中具有重要意義，尤其是在血液系統腫瘤、實體瘤和免疫相關疾病的診斷、治療和預后評估中發揮著關鍵作用。例如，在淋巴造血系統疾病中，克隆性檢測可以區分反應性增殖（如感染引起的免疫細胞增生）和惡性克隆性疾?。ㄈ缌馨土龊桶籽。?。此外，在自身免疫病中，克隆性檢測可用于評估異常T/B細胞的擴增情況，有助于鑒別疾病類型。
② 克隆性檢測方法
目前，細胞克隆性檢測的主要方法包括基因重排分析（IGH/TCR重排檢測）、免疫電泳、熒光原位雜交 (FISH) 、單細胞測序和流式細胞術等。
基因重排分析
利用PCR擴增免疫球蛋白重鏈 (IGH) 或T細胞受體 (TCR) 基因的可變區，檢測克隆性擴增。
優點：靈敏度高，可用于低豐度克隆檢測；適用于T/B細胞克隆性分析。
缺點：無法提供細胞形態或表型信息；需要特定的引物設計以及高質量DNA，可能受樣本降解影響。
免疫電泳
通過電泳分離血清中的免疫球蛋白，檢測是否存在單克隆性免疫球蛋白。
優點：可以快速、高效地對多種蛋白同時進行檢測，適用于多發性骨髓瘤等疾病的診斷。
缺點：靈敏度相對較低，且不能直接檢測細胞克隆性。
熒光原位雜交
利用熒光探針檢測細胞核中特定基因或染色體異常（如BCL2、MYC重排）。
優點：特異性高，可直接觀察染色體異常，適用于惡性克隆性腫瘤。
缺點：檢測通量有限；對某些克隆擴增的敏感性不足。
流式細胞術
相比上述方法檢測細胞克隆性，流式細胞儀檢測的最大優勢在于，可以同時檢測多個標記物，提供更全面的免疫表型信息，通過不同抗原對異常細胞進行設門再精確分析異常細胞的克隆性，特異性更高，適用于淋巴瘤、白血病的克隆性鑒定。
③ 流式如何實現細胞克隆性檢測
在B細胞和T細胞淋巴細胞的成熟過程中，抗原受體基因——免疫球蛋白 (IGH) 和T細胞受體 (TCR) 通過在可變 (V) 和連接 (J) 區域，或者在多樣性 (D) 區域發生基因重排，從而產生了適應性免疫反應的不同抗原結合部分，因此造就了淋巴細胞抗原特異性受體的廣泛多樣性，也是免疫系統應對多種病原體的基礎。
體細胞基因重排組成TCR示意圖
據估計，IGH基因或TCR基因可發生超過200萬次重排。兩個正常淋巴細胞發生相同重排的可能性可以忽略不計，但是惡性淋巴細胞來源于單個腫瘤細胞，往往表現出相同的IGH或TCR基因重排。因此通過流式細胞術進行細胞IGH或TCR是否存在限制性，便可用于檢測淋巴瘤等疾病的細胞單克隆性。
TCR是T細胞表面的特征性標志，根據TCR組成鏈的不同，可將T細胞分為αβ T細胞和γδ T細胞，其中αβ T細胞約占T細胞的95%~99%，γδ T細胞約占1%~5%。由于αβ T細胞占T細胞的絕大多數且重排率更高，目前流式主要通過對αβ T細胞的TCR的克隆分布檢測來評估T細胞克隆性，主要有兩種方案：TCR-Vβ受體庫檢測以及TRBC1/TRBC2檢測。
TCR-Vβ受體庫檢測
通過檢測TCR β鏈可變區 (TCR-Vβ) 受體的多樣性來進行克隆性檢測。正常T細胞TCR-Vβ抗原為多克隆，腫瘤細胞表現為單個克隆的優勢增生。貝克曼庫爾特生命科學公司提供的TCR-Vβ受體庫試劑盒（貨號：IM3497）包含了8組24個TCR-Vβ抗體，適合于所有流式細胞儀檢測。
檢測結果圖例
正常T細胞TCR-Vβ抗原分布
單克隆性T細胞的異常表達
由于TCR-Vβ受體的種類比較多，該受體庫試劑盒的抗體種類僅覆蓋70%左右的T細胞克隆，如果TCR-Vβ家族總和過低，可能提示存在試劑盒無法覆蓋的TCR-Vβ克隆性，也可作為單克隆性的證據。
TRBC1/TRBC2檢測
與TCR-Vβ受體庫檢測的是TCR β鏈的可變區不同，TRBC1/2檢測的是TCR β鏈恒定區結構域的抗體。在TCR基因重排過程中，T細胞受體的β亞基恒定區 (TRBC) 僅有兩種多態性，即TRBC1或TRBC2，每個TCR以隨機和互斥的方式不可逆地選擇兩個恒定區域中的一個進行表達，類似于B細胞κ和λ，為多克隆表達。當某一TRBC群體的表達比例大于85%或小于15%時，則提示單克隆性表達。
檢測結果圖例
健康人外周血流式細胞術結果顯示，總T細胞、CD4+（青色）和CD8+（橙色）T細胞上存在多型TRBC表達
單克隆T細胞表達TRBC限制性圖例
相比TCR-Vβ受體庫復雜的操作，TRBC1/2檢測是更簡單高效的選擇。目前，貝克曼庫爾特生命科學公司也全新推出了TRBC1/2的檢測試劑，感興趣的小伙伴歡迎垂詢或訂購！如需要了解更多信息，請與貝克曼庫爾特公司的業務代表聯系！
參考文獻
Anaya JM, Shoenfeld Y, Rojas-Villarraga A, Levy RA, Cervera R, editors. Autoimmunity: From Bench to Bedside [Internet]. Bogota (Colombia): El Rosario University Press; 2013 Jul 18. PMID: 29087650.
Bagg A. Immunoglobulin and T-cell receptor gene rearrangements: minding your B's and T's in assessing lineage and clonality in neoplastic lymphoproliferative disorders. J Mol Diagn. 2006 Sep;8(4):426-9; quiz 526-7. doi: 10.2353/jmoldx.2006.060108. PMID: 16931581; PMCID: PMC1876159.
Horna P, Weybright MJ, Ferrari M, Jungherz D, Peng Y, Akbar Z, Tudor Ilca F, Otteson GE, Seheult JN, Ortmann J, Shi M, Maciocia PM, Herling M, Pule MA, Olteanu H. Dual T-cell constant β chain (TRBC)1 and TRBC2 staining for the identification of T-cell neoplasms by flow cytometry. Blood Cancer J. 2024 Feb 29;14(1):34. doi: 10.1038/s41408-024-01002-0. PMID: 38424120; PMCID: PMC10904869.
Shi M, Jevremovic D, Otteson GE, Timm MM, Olteanu H, Horna P. Single Antibody Detection of T-Cell Receptor αβ Clonality by Flow Cytometry Rapidly Identifies Mature T-Cell Neoplasms and Monotypic Small CD8-Positive Subsets of Uncertain Significance. Cytometry B Clin Cytom. 2020 Jan;98(1):99-107. doi: 10.1002/cyto.b.21782. Epub 2019 Apr 11. PMID: 30972977.
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